环境污染目前是一种日趋严重的设计问题，由于工业化的进程，大量的化学物质通过各种途径排放到开放环境中，造成严重的污染。环境内分泌干扰物主要是指一系列工业生产排放的污染物质以及其降解物质，通过各种渠道进入人体后，干扰人体体内的内环境的稳定，影响人体的内分泌激素的合成、释放等一系列的分泌代谢途径［1，2］。其中环境内分泌干扰物会对人体的性激素影响最大。有研究表明，环境内分泌干扰物具有显著的生殖毒性［3，4］，特别是对于儿童的影响更为深远。儿童是出于生长发育的关键时期，若受到环境内分泌干扰物的影响，对于其自身的性发育以及生殖器官功能等均有可能导致永久性的伤害。本文主要是探讨环境内分泌干扰物与儿童性发育异常两者的相关性。
1 资料和方法
1. 1 一般资料
将我院从2010 年3 月至2013 年3 月专科门诊收治的性发育异常患儿共45 例作为观察组，均符合性早熟诊断标准。患儿的年龄在4 岁到10 岁之间，均为女性患者。入选患者均排中枢神经系统、内分泌系统疾病及先天性生殖器官器质性病变患者。同时选取同时期来我院实施健康检查性发育正常女童45例作为对照组。两组受试者的年龄、体重比较差异均无统计学意义，具有可比性。
1. 2 研究方法
采集两组儿童的血液样本进行检测。环境内分泌干扰物主要检测辛基酚( OP) 、双酚A( BPA) 和邻苯二甲酸酯类( DBP，DEHP) 。其中OP 和双酚A 通过高效液相色谱法进行测定，邻苯二甲酸酯类则通过气相色谱法进行测定。
双酚A 的样本处理: 收集两组儿童的血液样本，在37℃的水中水浴1h，然后进行离心取血清0. 5mL。将收集的血清在－80℃的超低下进行保存。测定前需要先将血清进行解冻，然后加入0. 01M，100μL 的磷酸缓冲溶液以及20μL 的β－葡萄糖酸酐酶进行萃取。再在37℃的水中水浴3h，冷却至室温后加入3mL 萃取液( 乙醚∶ 正宜烷1∶ 1) ，蜗旋2min 使样本与萃取剂混合均匀。静置后取上层液体，再次萃取上层有机相。将2 次萃取的有机相合并后用氮气将有机萃取剂吹干，检测前用50μL的乙腈复溶。
OP 的预处理: 采取受试者的血液样本后离心取得血清，在1mL 的血清中加入5mL 的正已烷，涡旋混合5min。将上层的有机相取出，置于50℃的水浴中自由挥干。在检测前用甲醇饱和的正已烷进行复溶，复溶至0. 1mL。取20μL 的上清液进样。
DBP，DEHP 的预处理: 除了需要处理样品外，还需要对在试样过程中使用到的玻璃器皿进行预处理。为了保持结果的真实性以及避免玻璃器皿表面对样本的污染，本试验使用的玻璃仪器均采用玻璃清洗剂进行浸泡清洗。清洗后需要用自来水和蒸馏水依次冲洗后烘干备用。在使用前还需要用正已烷润洗玻璃仪器3 次。取离心处理得到的血清1mL 加入5mL 的正已烷进行萃取。涡旋10min 后再次进行离心，转速3000r /min，离心时间为5min。离心后取上清液，用空气吹干。在检测前加入200μL 的甲醇饱和的正已烷复溶，取20μL 进样。
色谱条件: 气相色谱的色谱条件，采用Sigma 公司的SPB－1 色谱柱，柱温采取梯度升温40℃保温2min 后到15℃ /min 然后180℃ /min。检测载气是氮气，流速是1mL/min，采用不分流进样方法进行检测。检测器是FID，检测和进样温度均为250℃。
高效液相色谱的色谱条件: OP 和双酚A 均采用ODS 色谱柱，OP 的检测流动相是甲醇∶ 水∶ 三氟乙酸( 1000 ∶ 50 ∶ 1) ，双酚A 的检测流动相是乙腈∶ 水∶ 四氢呋喃( 40 ∶ 60 ∶ 3) ，1mL/min，柱温为40℃。检测仪器采用荧光检测器，激发波长OP 是275nm，双酚A 是227nm，发射波长分别是312nm 和310nm。
1. 3 统计学处理
对文中所得数据采用SPSS13. 0 统计学软件进行处理，计量资料采用珋x ± s 进行表示，组间比较行t 检验，计数资料行卡方检验，当P＜0. 05 为差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 两组儿童血清中OP，双酚A 以及邻苯二甲酸酯类( DBP，DEHP) 的含量比较对比观察组和对照组两组儿童体内的的环境内分泌干扰物含量，观察组患儿的环境内分泌干扰物的含量明显要高于对照组儿童，两组儿童对比有显著性差异( P＜0. 05) 。见表1。
2. 2 两组儿童血清中OP，双酚A 的分布情况对比两组儿童血清中检出OP，双酚A 的情况以及含量分布情况。其中OP 的保留时间为13. 822min，双酚A 的保留时间为11. 942min。观察组有53. 3%的患儿被检测出其体内含有辛基酚明显要高于对照组的6. 67%，两组对比有显著性差异( P ＜0. 05) ; 而观察组有48. 9%的患儿其体内含有双酚A，明显要高于对照组儿童的8. 89%，两组儿童对比有显著性差异( P＜05) 。见表2。
2. 3 两组儿童血清中邻苯二甲酸酯类的分布情况 气相色谱中DBP 的保留时间为13. 623min，DEHP 的保留时间为16. 830min。其中观察组中有62. 2%的患者检测出其体内含有DBP，明显高于对照组的8. 89%，两组儿童对比有显著性差异( P＜0. 05) ；而DEHP 则有57. 8% 的观察组患儿的血清中能够被检测到，明显要高于对照组的的13. 3%，两组儿童对比有显著性差异( P＜0. 05) 。见表3。
3 讨论
环境内分泌干扰物是指工业废料向环境排放的物质以及其降解产物。人体接触以上物质后有可能会导致体内激素分泌异常。环境内分泌干扰物的特点是，该类物质的含量少，但联合几种环境内分泌干扰物会产生巨大的毒性。另外，环境内分泌干扰物的化学性质相对较为稳定，脂溶性高容易被机体吸收，但却不容易受到体内的生物降解作用［5－9］。因此环境内分泌干扰物不容易被排除体外。环境内分泌干扰物对于性发育的影响主要有半衰期长，并且容易和体内的生物链发生连接从而达到蓄积效果［10］; 另外其敏感性高，极少的量即可以影响患者的下丘脑－ 垂体－ 性腺轴发生应答从而产生性激素。特别是对于处于性发育阶段的儿童。由于儿童对于环境具备比成人更高的易感性和敏感性。一方面，儿童的基础代谢率高，使得其呼吸频率以及摄取的需求大大提高，这会大大提高儿童对于环境内分泌干扰物的接触和吸收的几率［11， 12］；另一方面，儿童对于性激素的敏感性也会严重的影响儿童的性发育过程。根据本文的研究结果显示，在正常儿童体内检出环境内分泌干扰物的含量以及病例明显要比性发育异常患儿的要低。两组儿童血清中OP、双酚A 以及邻苯二甲酸酯类( DBP，DEHP)的含量比较，观察组患儿的环境内分泌干扰物的含量明显要高于对照组儿童。两组儿童血清中OP、双酚A 的分布，观察组有53. 3%的患儿被检测出其体内含有辛基酚明显要高于对照组的6. 67%，而观察组有48. 9% 的患儿其体内含有双酚A，明显要高于对照组儿童的8. 89%。而DEHP 则有57. 8% 的观察组患儿的血清中能够被检测到，明显要高于对照组的的13. 3%。这显示出环境内分泌干扰物存在儿童体内有可能会导致儿童性发育异常。本文的研究结果也与其他文献报道的环境内分泌干扰物对于儿童性发育影响结果相一致［13－15］。
环境内分泌干扰物对于儿童的生长发育，特别是性发育有着严重的影响，因此需要有关部门加强对于环境保护和清理的措施。同时对于已经出现性发育异常的患儿需要及时采取干预手段，避免性激素水平的异常引起患儿的永久性的发育不全。
参考文献
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